• 日本サッカー協会に登録している選手で平成21年（2009年）3月31日以前の生まれの選手（小学生は登録できない）
• 「下部組織チーム」として「クラブ申請」登録を行ったチームから登録することができる
• 外国籍選手は5名登録、3名までが出場できる
• 各試合にエントリーできる選手は18名以内とする
• 各試合の選手の交代は5名以内とする

リーグ戦の全試合が終了した時点で、勝点（勝利3点、引分け1点、敗戦0点）の多いチームを上位とし、順位を決定する。ただし、勝点の合計が同一の場合は次の順序により順位を決定する。

1. 全試合の得失点差
2. 全試合の総得点数
3. 該当するチーム間の対戦成績　(1)勝点 (2)得失点差
4. 全試合の反則ポイント

＜2021プレナスなでしこリーグ1部・2部入替戦＞

1. なでしこリーグ1部における年間順位の12位チームがなでしこリーグ2部に降格し、なでしこリーグ2部の優勝チームがなでしこリーグ1部に昇格する。
2. なでしこリーグ1部における年間順位が11位のチームとなでしこリーグ2部における2位のチームとが入替戦を行い、勝者が翌シーズンのなでしこリーグ1部、敗者が翌シーズンのなでしこリーグ2部となる。